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w88优德体育手机app登录:抗体常见问题之WB

问题 原因 解决方案
条带形状不好看 凝的不均匀,聚合不好 灌胶前将溶液充分混匀
上样齿扭曲使上样孔大小不一 上样前用针头将齿拨正,注意不要将针头插入胶内
某些样品盐浓度较高 除盐或将样品盐浓度调成一致
每孔上样量不一致 调整上样量使基本一致
缓冲液陈旧,成分改变 重配
凝胶下面有气泡 电泳前先将气泡赶走
电泳时温度过高 降低电流或电压
目的【优德线上娱乐场】蛋白信号弱 样品上样量不足或目的【优德线上娱乐场】蛋白浓度过低 加大上样量或浓缩样品
转膜效率低 以下单列
w88优德体育手机app登录:抗体浓度低 增加w88优德体育手机app登录:抗体浓度或延长孵育时间
显色剂底物浓度不足 增加显色剂用量
显色剂失效 更换显色剂(吸取A、B液的枪头不可混用)
显色或曝光时间不足 延长显色或曝光时间
转膜效率低 转膜缓冲液pH值与目的【优德线上娱乐场】蛋白等电点相近 提高转膜缓冲液pH值
凝胶与膜之间存在气泡 转膜前要排尽气泡
凝胶与转印膜两侧滤纸大面积接触 滤纸、转印膜和凝胶大小要基本一致,避免滤纸直接接触
转印膜种类选择不当 使用质量可靠的PVDF膜或硝酸纤维素膜
电压或电流过小 湿转时20mA恒流,半干转时25V左右恒压
转印时间过长或过短,【优德线上娱乐场】蛋白还在凝胶中或穿透转印膜 先电泳,根据【优德线上娱乐场】蛋白大小及转印装置选择合适的转印时间
湿转过程中环境温度过高 使用预冷的转膜缓冲液或将装置至于4度
显色或曝光后无条带 胶与膜方向反了 转膜时应依次放好PDVF膜与凝胶所对应的电极,即凝胶对应负极,PDVF膜对应正极。
选用的一抗、二抗及显色方法不合适 选择合适的一抗、二抗和显色方法
目的【优德线上娱乐场】蛋白含量低于检测下限 加大上样量或浓缩样品
w88优德体育手机app登录:抗体效价过低 增加w88优德体育手机app登录:抗体浓度
w88优德体育手机app登录:抗体孵育时间不足 延长孵育时间,37°C孵育1小时以上
w88优德体育手机app登录:抗体过度洗涤 减少洗涤时间及次数
加入HRP底物反应与曝光检测之间间隔时间过长 反应3到5分钟及时检测
背景过高 封闭物用量不足 提高封闭物浓度,孵育时保证封闭液完全浸没转印膜
封闭物使用不当 检测生物素标记的【优德线上娱乐场】蛋白时不可用脱脂奶粉封闭
封闭时间不够 室温37度封闭1小时以上,4度封闭过夜
w88优德体育手机app登录:抗体非特异性结合 降低w88优德体育手机app登录:抗体浓度,减少孵育时间
w88优德体育手机app登录:抗体浓度过高或洗涤不够 降低w88优德体育手机app登录:抗体浓度,增加洗涤次数和时间
化学显色底物过多 按说明书加入适量的显色底物
杂带 杂【优德线上娱乐场】蛋白多 处理目的【优德线上娱乐场】蛋白
w88优德体育手机app登录:抗体特异性不强 使用特异性强的w88优德体育手机app登录:抗体
w88优德体育手机app登录:抗体孵育时间过久 减少w88优德体育手机app登录:抗体孵育时间
二抗与抗原有交叉反应 选择合适的封闭物
底物显色与曝光时间长了 缩短显色及曝光的时间
大分子量WB 膜孔径太小 更换孔径较大的膜
转膜电压电流低 提高电压/电流
转膜时间短 延长转膜时间
胶浓度太大 使用低浓度的胶
转膜缓冲液配方不合适 调整转膜缓冲液中甲醇及SDS浓度


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